الفرق بين سانجر التسلسل و بايروسكنسينغ | سانجر تسلسل فس بايروسكنسينغ

الفرق الرئيسي - سانجر التسلسل مقابل بايروسكنسينغ

تسلسل الحمض النووي مهم جدا لتحليل الحمض النووي منذ المعرفة من الترتيب النوكليوتيدات الصحيح على منطقة دنا معينة يكشف عن العديد من المعلومات الهامة حول هذا الموضوع. هناك طرق مختلفة تسلسل الحمض النووي. سانجر التسلسل و بايروسكنسينغ هي اثنين من أساليب تسلسل الحمض النووي المختلفة المستخدمة على نطاق واسع في البيولوجيا الجزيئية. والفرق الرئيسي بين سانجر التسلسل و بايروسكنسينغ هو أن يستخدم سانجر تسلسل ديديوكسينوكليوتيدس لإنهاء تركيب الحمض النووي لقراءة تسلسل النيوكليوتيدات في حين بايروسكنسينغ بالكشف عن الافراج بيروفوسفات من خلال دمج النيوكليوتيدات وتوليف تسلسل تكميلي لقراءة الترتيب الدقيق لل تسلسل.

المحتويات

1. نظرة عامة والفرق الرئيسي

2. ما هو سانجر التسلسل

3. ما هو بايروسكنسينغ

4. جنبا إلى جنب مقارنة - سانجر التسلسل مقابل بايروسكنسينغ

5. ملخص

ما هو سانجر التسلسل؟

التسلسل سانجر هو طريقة تسلسل الحمض النووي الجيل الأول التي وضعتها فريدريك سانجر وكلياته في عام 1977. كما يعرف باسم سلسلة تسلسل إنهاء أو ديديوكسي تسلسل لأنه يقوم على إنهاء سلسلة من قبل ديديوكسينوكليوتيدس (دنتبس). وقد استخدم هذا الأسلوب على نطاق واسع لأكثر من 30 عاما حتى تم تطوير تسلسل الجيل الجديد (نغس). تمكنت تقنية سانجر التسلسل من اكتشاف النظام النوكليوتيدات الصحيح أو المرفق من جزء دنا معين. لأنه يقوم على دمج انتقائي من دنتبس وإنهاء تركيب الحمض النووي خلال في المختبر تكرار الحمض النووي. غياب 3 'مجموعات أوه لمواصلة تشكيل فوسفهوديستر السندات بين النيوكليوتيدات المجاورة هي سمة فريدة من نوعها من دنتبس. وبالتالي، بمجرد إرفاق دنبتب، يتوقف استطالة السلسلة وينتهي من تلك النقطة. هناك أربعة دنتبس - داتب، دكب، دغب و دتب - المستخدمة في التسلسل سانجر. هذه النيوكليوتيدات توقف عملية تكرار الحمض النووي عندما يتم دمجها في حبلا المتنامية من الحمض النووي وتؤدي إلى أطوال متفاوتة من الحمض النووي قصيرة. يستخدم شعري هلام الكهربائي لتنظيم هذه خيوط الحمض النووي قصيرة من أحجامها على هلام كما هو مبين في الشكل 01.

الشكل 1: شعري الكهربائي للهلام من القصير DNA توليفها

لل في المختبر تكرار الحمض النووي، وينبغي توفير بعض المتطلبات. وهي إنزيم البلمرة الحمض النووي، دنا قالب، الاشعال أوليغونوكليوتيد، و ديوكسينوكليوتيدس (دنتبس). في التسلسل سانجر، يتم تنفيذ النسخ المتماثل الحمض النووي في أربعة أنابيب اختبار منفصلة جنبا إلى جنب مع أربعة أنواع من دنتبس بشكل منفصل. لا يتم استبدال ديوكسينوكليوتيدس تماما من قبل دنتبس منها. يتم تضمين خليط من دنتب معين (على سبيل المثال؛ داتب + داتب) في الأنبوب وتكرارها. يتم تشغيل أربعة منتجات أنابيب منفصلة على هلام في أربعة آبار منفصلة. ثم من خلال قراءة هلام، ويمكن بناء تسلسل كما هو مبين في الشكل 02.

الشكل 02: التسلسل سانجر

سانجر التسلسل هو تقنية هامة تساعد في العديد من مجالات البيولوجيا الجزيئية. وقد اكتمل بنجاح مشروع الجينوم البشري بمساعدة أساليب سانجر القائمة على التسلسل. سانجر تسلسل مفيد أيضا في تسلسل الحمض النووي الهدف والسرطان والأمراض الوراثية البحوث، وتحليل التعبير الجيني، وتحديد الإنسان، والكشف عن العوامل المسببة للأمراض، والتسلسل الميكروبي الخ

وهناك عدة عيوب سانجر التسلسل:

• ويبلغ طول الكائن DNA تسلسل لا يمكن أن يكون أطول من 1000 أزواج قاعدة
• واحد فقط ستراند يمكن تسلسل في وقت واحد.
• عملية تستغرق وقتا طويلا ومكلفة.

لذلك، تم تطوير تقنيات تسلسل متقدمة جديدة مع مرور الوقت للتغلب على هذه المشاكل. ومع ذلك، سانجر التسلسل لا يزال قيد الاستخدام نظرا لنتائجه دقيقة للغاية تصل إلى ما يقرب من 850 قاعدة شظايا طول الزوج.

ما هو بايروسكنسينغ؟

بايروسكنسينغ هو تقنية تسلسل الحمض النووي الرواية على أساس "التسلسل عن طريق التوليف". هذه التقنية تعتمد على الكشف عن الافراج بيروفوسفات على تأسيس النوكليوتيدات. يعمل هذه العملية عن طريق أربعة إنزيمات مختلفة: polymerse DNA، sulfurylase ATP، وسيفيراز وآبيراز واثنين من ركائز الأدينوساين 5 'phosphosulfate (APS) ووسيفيرين.

تبدأ العملية مع التمهيدي ملزمة مع قالب الحمض النووي واحد تقطعت بهم السبل والبوليميراز الحمض النووي يبدأ دمج النيوكليوتيدات مكملة لذلك. عندما ينضم النوكليوتيدات معا (البلمرة الحمض النووي)، فإنه يطلق البيروفوسفات (مجموعتين الفوسفات مرتبطة معا) مجموعات والطاقة. كل إضافة النوكليوتيدات تطلق كمية متساوي الأقطاب من بيروفوسفات. بيروفوسفات يتحول إلى أتب من قبل أتب سولفوريلاس في وجود أبس الركيزة. و أتب ولدت يدفع تحويل بوسيفيراس لوسيفيرين من لوسيفيرين إلى أوكسيلوسيفيرين، وإنتاج الضوء المرئي في المبالغ التي تتناسب مع كمية أتبس. تم الكشف عن الضوء من قبل جهاز الكشف عن الفوتون أو عن طريق مضخم ضوئي ويخلق بيروغرام. أبيراس ديغرادس أتب و دنتبس غير المدرجة في خليط التفاعل. يتم إضافة دنتب مرة واحدة في وقت واحد. وبما أن إضافة النوكليوتيدات يعرف وفقا لدمج والكشف عن الضوء، ويمكن تحديد تسلسل القالب.يستخدم بيروغرام لتوليد تسلسل النيوكليوتيدات من الحمض النووي العينة كما هو مبين في الشكل 03.

بايروسكنسينغ مهم جدا في تحليل تعدد الأشكال النوكليوتيدات واحد وتسلسل فترات قصيرة من الحمض النووي. دقة عالية، والمرونة، وسهولة التشغيل الآلي والمعالجة الموازية هي مزايا بايروسكنسينغ على تقنيات التسلسل سانجر.

الشكل 03: بايروسكنسينغ

ما هو الفرق بين سانجر التسلسل و بايروسكنسينغ؟

- ديف المادة قبل منتصف الجدول>>

سانجر التسلسل مقابل بيروسكنسينغ
سانجر التسلسل هو طريقة تسلسل الحمض النووي على أساس دمج انتقائي من دنتبس من قبل البلمرة دنا وإنهاء السلسلة.	بايروسكنسينغ هو طريقة تسلسل الحمض النووي على أساس الكشف عن الإفراز بيروفوسفات عند دمج النيوكليوتيدات.
استخدام دنب
تستخدم دنبتبس لإنهاء النسخ المتماثل دنا	لا يتم استخدام دتبتبس.
الإنزيمات المعنية
تستخدم البلمرة دنا.	يتم استخدام أربعة إنزيمات: بوليميراز دنا، أتب سولفوريلاس، لوسيفيراس وأبيراس.
ركائز مستعملة
أبس و لوسيفيرين غير مستخدمة.	أدينوسين 5 'فسفوسلفات (أبس) و لوسيفيرين تستخدم.
درجة الحرارة القصوى
هذه عملية بطيئة.	هذه عملية سريعة.

ملخص - سانجر سيكنسينغ فس بايروسكنسينغ

سانجر التسلسل و بايروسكنسينغ هي طريقتين لتسلسل الحمض النووي المستخدمة في البيولوجيا الجزيئية. ترتيب سانجر يبني ترتيب النيوكليوتيدات في تسلسل بإنهاء استطالة السلسلة في حين أن بايروسكنسينغ يبني الترتيب الدقيق للالنوكليوتيدات في تسلسل عن طريق دمج النيوكليوتيدات والكشف عن الافراج عن بيروفوسفاتس. ولذلك، فإن الفرق الرئيسي بين التسلسل سانجر و بايروسكنسينغ هو أن تسلسل سانجر يعمل على التسلسل عن طريق سلسلة إنهاء بينما بايروسكنسينغ يعمل على التسلسل عن طريق التوليف.

المرجع:

1. فاكرودين، مد، و أبهيجيت شودري. "بايروسكنسينغ-بديل لسلاسل سانجر التقليدية. "المجلة الأمريكية للكيمياء الحيوية والتكنولوجيا الحيوية. المنشورات العلمية، 02 آذار / مارس 2012. ويب. 28 فبراير 2017.

2. "سانجر التسلسل. "سانجر التسلسل - سسينسديريكت المواضيع. N. p. ، n. د. على شبكة الإنترنت. 28 فبراير 2017

إيماج كورتيسي:

1. "ديديسوكسي-ميثودي" من قبل كريستوف غومانز (موديفيزييرت) - الدكتور نورمان ماودر، أوف باسيس إينر ديتي فون كريستوف غومانز (سيسي بي-سا 3. 0) عبر كومونس ويكيميديا ​​

2. "سانجر-دنا-سيق" من قبل إنزو في اللغة البولندية ويكيبيديا (سيسي بي-سا 3. 0) عبر ويكومديا كومونس

3. "بايروسكنسينغ" بواسطة ميكروبيولوغيبيتس (سيسي بي-سا 2. 0) عبر فليكر